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更新時間：2025-01-06 
瀏覽次數(shù)：1285本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（HIV-1 P24）的含量。
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（HIV-1 P24）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人類免疫缺陷病毒1型p24抗原（HIV-1 P24）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑盒性能
檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
靈敏度：檢測濃度小于0.1 ng/mL。
特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。
酶標儀（450nm） 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒溫箱 蒸餾水或去離子水 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL； 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
需要而未提供的試劑和器材
試劑盒組成
備注：名稱 96孔配置 48孔配置 備注 微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無 標準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無 樣本稀釋液 6mL 3mL 無 檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無 20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋 底物A 6mL 3mL 無 底物B 6mL 3mL 無 終止液 6mL 3mL 無 封板膜 2張 2張 無 說明書 1份 1份 無 自封袋 1個 1個 無
1. 標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0.25 ng/mL
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
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